Caracterización molecular de las proteínas involucradas en el ensamblado de los complejos SNAREs durante la exocitosis acrosomal en espermatozoides humanos
Autor/es: Flores Montero, Karina Johana;
Director/a: Ruete, M. Celeste
Co-director/a: Berberian, M. Victoria
Tipo de tesis: Tesis de Doctorado
Título al que opta: Doctor/a en Ciencia y Tecnología
Carrera / Programa: Doctorado en Ciencia y Tecnología
Unidad Académica / Dependencia: Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Institución otorgante: Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Año de realización / defensa: 2023
Cantidad de páginas: 170 p.
Idioma: Español
Resumen en Español:
Las proteínas CSP, Hsc70 y SGTA han sido ampliamente estudiadas por formar un complejo trimérico que cumple funciones de chaperona con las proteínas SNARE, piezas principales en la fusión de membranas, durante los procesos de exocitosis en neuronas y células neuroendocrinas. En el presente trabajo de investigación, se evaluó por primera vez la presencia de estas proteínas en la región acrosomal de los espermatozoides humanos y su participación en el ensamble de los complejos SNARE en configuración trans, requisito necesario en el espermatozoide, para llevar a cabo la reacción acrosomal. Inicialmente, demostramos la presencia de estas tres proteínas en el espermatozoide humano y su localización específica en la región acrosomal. Posteriormente verificamos que dos de ellas, la proteína CSP y la Hsc70, participan directamente en el proceso de exocitosis del acrosoma.
A través de ensayos de Dot Blot, evaluamos la interacción que se producía entre las proteínas CSP y Hsc70, confirmando que forman un complejo en el espermatozoide humano, como se había descrito en otros modelos celulares. Ideando ensayos funcionales localizamos el accionar de la proteína CSP, en la cascada de señalización que conlleva a la reacción acrosomal, ubicándola antes de la salida del calcio contenido en el acrosoma y luego del accionar de las chaperonas NSF/αSNAP. Gracias al uso de las neurotoxinas como herramientas moleculares, determinamos que CSP es necesaria para el ensamble de los complejos SNARE en configuración trans. Finalmente, comparamos el accionar de la proteína CSP recombinante con su par permeable, obteniendo similares resultados y verificando el éxito del modelo de espermatozoides permeabilizados.
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